石蜡块包埋组织怎么用，一文就够了

目前，随着高通量基因和生物信息学发展，常见的高端文章要么是冷冻电镜解析一个结构（大爆发，华人学者一周内发表10篇CNS主刊！），要么就是大批临床标本的大规模测序识别突变和表达信息（简讯：太牛了！测了2000多肿瘤样本的circRNA数据，怪不得发Cell！）。实验技术越来越先进，实验思路越来越跨界，而做实验的学生们则越来越迷茫。

为此，本文尝试 “温故而知新”，选取了一个最普通基础的主题：石蜡块，来做一次相关内容的汇总。

图源：网络

一、组织石蜡块的准备与制作

用于制作石蜡块的组织要新鲜，组织固定液为10%中性福尔马林，固定液体积最好为组织体积的10倍以上，如果低于5倍或者只是液体浸没组织，则会导致组织固定不充分，只是表面固定，内部组织随着时间会腐烂，影响结果。

经福尔马林固定的组织并不是能够长时间保存，需要在72小时内尽快完成石蜡块的包埋为最佳，以保证组织蛋白的表达结果不受实验偏倚影响。如果不能在数天内完成下一步的石蜡块包埋，最好能在4度冰箱冷藏保存，而不宜常温保存。石蜡块的包埋需要经过脱水和浸蜡。脱水的质量好坏直径影响后期组织与蜡的相互融合。

此外，石蜡原材料的原则也是至关重要，面对不同的组织，需要动态调整石蜡成分，韧性高的实质组织，可以采用高熔点的石蜡块，而像肠壁和腺体等柔软的组织，可以选较低熔点的石蜡块。此外，包埋石蜡块的底座平整与否直接影响了标本切片时的损耗。所以，这里提醒一点：同样的石蜡块组织，可能由于石蜡块底部的坑洼，导致修片过程中大量的损耗了组织。

二、常用制作石蜡块途径

（如果是大佬课题组，请直接跳过这段。）

1. 自制

优点：几乎没有额外费用，即做即用。

缺点：国内大部分中小规模的实验室或者课题组并没有配套相应石蜡块制作设备。

2. 石蜡块制作外包的选择

目前大部分的课题所需石蜡块均为外包途径。而外包对象主要有两种：专门实验技术公司和大学基础医学病理相关的服务支持。如何选择呢？

专门公司制作石蜡块，第一速度快，毕竟以利益为驱动；第二服务好，一个电话，就可以像寄快递一样，足不出户，上门收货上门送货；第三具有服务行业的优点，除外可能威胁直接经济利益的，其他配套服务，比如提供咨询和配套材料均会免费，毕竟现在国内的专门实验技术公司尚处于市场开展阶段，没有浓重的官僚气或者垄断局面。

而基于大学基础医学病理相关的服务，一般就比较局限在本校内部，生产力有限，大多时候需要排队，质量不能完全说优质。然而最具有话题性的，在目前改革阶段，是这些校内的公共服务亦或者平台，不断改革适应市场和校外需求。不过一般来说，价格收费改革的最快，与市场公司快速一致，而服务质量方面总会落后一拍，造成了“办事难、办事贵”的现状。因此，如果想省心有尊严的主导自己的石蜡块，最好还是支持市场驱动的实验技术公司。值得注意的是，实验技术公司在石蜡块的制作，原材料使用以及protocol的遵循上都各有不同，因此石蜡块质量也因此良莠不齐。价格上，从10元/个到50元/个不等。一般来说，包埋数量巨大，容易在包埋后出现问题。但是一般课题所需的十几个至几十个的组织送包埋石蜡块，公司都是性价比最高，最省事省时的选择。

三、石蜡块的保存

石蜡块组织不同于-80度冰冻组织，只要避光密封，可以室温永久保存。而石蜡块获得的切片经过HE或者免疫组化染色，正确封片后也可以永久保存，相比冷冻切片和免疫荧光具有独特的优势。

四、如何将小小石蜡块利用率最大化

目前石蜡块包埋组织存量最大的地方集中在各个医院病理科，而这些石蜡组织是相当针对的临床-分子生物学研究材料。除外上述技术，在石蜡切片完成原位PCR等分子生物学技术，也是对免疫组化的重要补充。

在如今高通量基因分析时代，往往采用的临床标本都是液氮处理的。而随着分子生物技术的进步，石蜡包埋的组织的利用也可以与时俱进了，能够用来进行基因层面的分析，比如二代测序等。当然，这种用来应用于基因分析的石蜡块也是有“保质期”的，所使用的石蜡块最佳时间为1-1.5年以内的新鲜石蜡块。如果石蜡块制成已经超过5年以上的，组织内的DNA等信息完整程度会大大下降，影响到后期数据的处理准确性和分析流程。

此外，通过将数个或者数十个石蜡块组织提取铅笔芯直径的组织，自制成小型组织芯片，既可以简化后期免疫组化的时间和费用，又可以最大程度的节省组织，还能标准化组化的结果。 总的来说，石蜡块组织在芯片技术的推广后，可以动态的有选择性分批次的进行研究，逐步形成了组织形态学的“活字印刷术”。

六、总结

虽然目前的实验日新月异，石蜡块依旧是相当可靠的实验资源，值得长期投资。

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